轉染（Transfection），是將外源性基因?qū)爰毎麅?nèi)的一種專門技術。隨著基因與蛋白功能研究的深入，轉染目前已成為實驗室工作中經(jīng)常涉及的基本方法。
轉染大致可分為物理介導、化學介導和生物介導三類途徑。那么你知道細胞轉染的方法有什么嗎？讓我們一起來看看吧！
轉染大致可分為物理介導、化學介導和生物介導三類途徑。
一、化學轉染法：
1.磷酸鈣法
原理：磷酸鈣DNA復合物吸附細胞膜被細胞內(nèi)吞
應用：穩(wěn)轉，瞬轉
特點：不適用于原代細胞，操作簡便但重復性差，有些細胞不適用
2.陽離子脂質(zhì)法
原理：帶正電的脂質(zhì)體與核酸帶負電的磷酸基團形成復合物被細胞內(nèi)吞
應用：穩(wěn)轉，瞬轉，所有細胞
特點：適用性廣，轉染效率高，重復性好，但轉染時需除血清，轉染效果隨細胞類型變化大
3.DEAE-右旋糖苷法
原理：帶正電的DEAE-右旋糖苷與核酸帶負電的磷酸骨架相互作用形成的復合物被細胞內(nèi)吞
應用：瞬轉
特點：相對簡便、結果可重復，但對細胞有一定的毒副作用，轉染時需除血清
二、生物轉染法
1.病毒介導法
原理：通過侵染宿主細胞將外源基因整合到染色體中
應用：穩(wěn)轉
特點：可用于難轉染的細胞、原代細胞，體內(nèi)細胞等
2.逆轉錄病毒
應用：持定宿主
特點：但攜帶基因不能太大細胞需處分裂，需考慮安全因素
3.腺病毒
原理：通過侵染宿主細胞將外源基因整合到染色體中
應用：瞬時轉染，待定宿主
特點：可用于難轉染的細胞，需考慮安全因素
三、物理轉染法
1.Biolistic顆粒傳遞法
原理：將DNA用顯微重金屬顆粒沉淀，再將包被好的顆粒用彈道裝置投射入細胞，DNA在細胞內(nèi)逐步釋放表達
應用：瞬轉
特點：可用于:人的表皮細胞，纖維原細胞，淋巴細胞系以及原代細胞
2.電穿孔法
原理：高脈沖電壓破壞細胞膜電位，DNA通過膜上形成的小孔導入
應用：穩(wěn)轉，瞬轉，所有細胞
特點：適用性廣但細胞致死率高，DNA和細胞用量大
3.顯微注射法
原理：用顯微操作將DNA直接注入靶細胞核
應用：穩(wěn)轉，瞬轉
特點：染細胞數(shù)有限，多用于工程改造或轉基因動物的胚胎細胞
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更新時間：2024-03-23
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